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支原體污染實(shí)驗(yàn)室全流程防控 + 試劑盒檢測實(shí)操指南
發(fā)布時間： 2026-08-25 點(diǎn)擊次數(shù)： 13次支原體一旦在實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)散，整批細(xì)胞、培養(yǎng)基全部報廢，清理消殺成本高，做好 “預(yù)防 + 定期檢測" 兩步走，杜絕污染。
一、實(shí)驗(yàn)室防控關(guān)鍵點(diǎn)
1. 三區(qū)分離操作：試劑配制區(qū)、樣本加樣區(qū)、陽性質(zhì)控專用操作臺，移液器、槍頭分開；
2. 操作順序：先陰性→待測樣本→最后陽性質(zhì)控，陽參單獨(dú)移液器，全程濾芯槍頭；
3. 超凈臺紫外 30–45min 通風(fēng)，實(shí)驗(yàn)前后 75% 酒精擦拭臺面；
4. 新細(xì)胞、外購血清、胰酶入庫前必須先做支原體檢測，再入培養(yǎng)箱；
5. 培養(yǎng)箱水盤定期更換無菌水，每周消殺，阻斷氣溶膠傳播。
二、翼和試劑盒標(biāo)準(zhǔn)實(shí)操（BPMPro100 高敏款）
1. 樣本富集：2mL 細(xì)胞上清 4℃ 15000rpm 離心 10min，小心棄上清，加裂解液重懸；
2. 抽提加 IC 內(nèi)標(biāo)：每管加入 6μL 內(nèi)部質(zhì)控，監(jiān)控提取效率；
3. Mix 配制：9μL 反應(yīng) Mix+1μL 探針引物，預(yù)留 1 孔損耗；
4. 每孔分裝 10μL Mix，加 15μL 石蠟油封層，加入 20μL 抽提 DNA 模板；
5. ABI 程序：94℃預(yù)變性 5min，兩階段擴(kuò)增，65℃收集熒光；
6. 結(jié)果判讀：內(nèi)參 Ct≤30 有效；樣本 FAM＜37.5 為陽性，≥37.5 陰性，3 復(fù)孔兩陽判定污染。
三、異常結(jié)果快速排查
1. 前處理陰性出現(xiàn) FAM 擴(kuò)增：抽提過程交叉污染；
2. 所有樣本內(nèi)參 Ct＞30：核酸抽提效率低或 PCR 體系失效；
3. 陽參 Ct＞30 但內(nèi)參正常：陽性質(zhì)控 DNA 降解。
全套操作 SOP、儀器參數(shù)模板可聯(lián)系翼和技術(shù)領(lǐng)取，從防控到檢測一站式解決支原體隱患。
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